Topoisomerase I（vaccinia）

トポイソメラーゼI（vaccinia）は、一本鎖DNAのホスホジエステル結合の切断と降格により、DNA超らせん構造の弛緩を触媒します。これにより、スーパーコイルが除去されます（正または負のスーパーコイル）。 Topoisomerase Iは機能するためにMg2+が必要ではありませんが、低濃度ではその活性が高める可能性があります。Vaccinia virusス由来のTopoisomerase Iは、標的配列[5' (C/T)CCTT]でDNA 3 'を切断するI型真核生物トポイソメラーゼです。もう一方のDNA鎖は切断されません。その後のホスホジエステル結合の再結合により、超らせんターンが少ないDNAが得られます。(C/T)CCTTサイトがDNA分子の末端にある場合、ニックの3'塩基はTopoisomerase I-DNA複合体から解離します。次に、Topoisomerase Iは、他のDNA二重鎖が切断されていない鎖と塩基対を形成できる場合、切断された(C/T)CCTT含有DNAを別のDNA二重鎖と結合することによって組換え分子を作成できます。Topoisomerase Iは、RNA分子の5'末端と組換え分子を形成することもできます。

アプリケーション

• DNAコイルを巻き戻して制限部位を露出させることにより、耐性DNA基質の制限エンドヌクレアーゼ消化を増加させます。
• 複製、転写、組換えなどの重要なプロセスを研究
• DNAの構造とトポロジーを研究。例えば、in vitro転写、in vitroでのクロマチン再構成、およびDNAのスーパーコイルの程度に対するスーパーコイルの影響。
• 長さが1塩基対のみ異なる変異プラスミドアッセイ

ユニットの定義

1ユニットは、1μgスーパーコイル状の閉じた円形（フォームI）pUC19 DNAを1時間でpH7.5、37℃でリラックスした閉じた円形（フォームII）に変換する酵素の量として定義されます。DNA超らせんは、臭化エチジウムの非存在下でのアガロースゲル電気泳動によって評価されます。

至適温度/温度不活性

至適温度：37℃

温度不活性：60℃、20分

品質管理

エンドヌクレアーゼフリー

エキソヌクレアーゼフリー

保存温度

-20℃

保存バッファー

10mM Tris-HCl, 35mM (NH4)2SO4, 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol pH 7.5 @ 25℃

10X Topoisomerase I (vaccinia) buffer

500 mM Potassium Acetate, 200 mM Tris-acetate, 100 mM Magnesium Acetate, 10 mM DTT, pH 7.9 @ 25℃