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Terminal Deoxynucleotidyl Transferase（TdT）
末端トランスフェラーゼとも呼ばれるTerminal Deoxynucleotidyl Transferase（TdT）は、無機リン酸の放出を伴う、DNAの3'-OH末端へヌクレオチドの付加を触媒するテンプレート非依存性DNAポリメラーゼです。TdTは、二本鎖DNAの3'突出末端を含む一本鎖DNAに作用します。TdTには5’または3'エキソヌクレアーゼドメインは含まれていません。Terminal Deoxylnucleotidyl Transferase（TdT）をコードする遺伝子をクローニングし、大腸菌で発現し均一に精製されます。
アプリケーション
- DNAの3’末端の標識
- DNAの3’末端へのホモポリマーテールの追加
- DNAシーケンシング
Fig1. Enzynomics社TdTは他社よりもプロセッシブです。
TdT（20および200 ng）は、5'末端を32Pラベルした15fmolの52nt ssDNAの存在下で37°Cで30分間インキュベートしました。TdTの2つの異なるバッチを他社製品と比較しました。4μlの6X停止溶液（40％スクロース、60 mM EDTA、1.2％SDS、0.05％ブロモフェノールブルー、および0.05％キシレンシアノール）を添加して反応を停止しました。反応生成物（緑と赤のボックス）は、1X TBE中の12％変性ゲル上で600Vで30分間分離されました。
- ユニットの定義
- 1ユニットは、標準的なアッセイ条件下で、37℃で60分間に1nmolのdATP残基がDNAに取り込まれるのを触媒する酵素の量として定義されます。
- 至適温度/温度不活性
- 至適温度：37℃
- 温度不活性：75℃、20分
- 保存温度
- -20℃
- 保存バッファー
- 50 mM KPO4 (pH 7.3), 100 mM NaCl, 1.43 mM 2-mercaptoethanol, 0.1% Triton X-100, 50% glycerol
- 10X Terminal Deoxynucleotidyl Transferase buffer
- 500 mM potassium acetate (pH 7.0), 200 mM Tris-acetate, 100 mM magnesium acetate.