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ゲノム編集細胞受託サービス

CRISPR-Cas9システムによるノックアウト等のゲノム編集細胞受託サービスです。

Synthegoゲノム編集細胞受託サービス

*本製品は研究用です。人又は動物の治療又は診断用に使用しないでください。

細胞プール 標的タンパク質をノックアウトしたノックアウト細胞プールの受託作成
CRISPRノックアウト細胞クローン 確認済みシーケンスのノックアウトクローン細胞株の受託作成
iPS細胞ゲノム編集受託サービス CRISPR編集された保証済みiPS細胞プールとクローン

細胞プール

スタンダードノックアウト・ノックイン細胞プール』の他に厳選された細胞とガイドでより短時間・安価なサービス NEWエクスプレス ノックアウト細胞プール』の2種類をご提案します。

Synthego 細胞プール一覧表

エクスプレス
ノックアウト細胞プール
エクスプレス
カスタム ノックアウト細胞プール
スタンダード
ノックアウト・ノックイン細胞プール
Multi-guide Technology
Synthegoが決定したシーケンス
(3つのsgRNAsまで)
ユーザーが決定したsgRNA
(1xsgRNA)
Synthego sgRNA
Synthegoが決定したsgRNAシーケンス
(1xsgRNA)
対象となる不死化細胞株 対象となる不死化細胞株 HumanまたはMouse不死化細胞株
HumanのiPSC
Synthego提供細胞株 Synthego提供細胞株 Synthego提供またはユーザー提供細胞株
ノックアウト ノックアウト ノックアウト
ノックイン
3週間以内 3週間以内 Knockouts:4-10週間
Knock-ins:6-12週間
2 vials, >100K cells/Vial 2 vials, >100K cells/Vial 〜500K cells
サンガ―シークエンスとICE解析 サンガ―シークエンスとICE解析 サンガ―シークエンスとICE解析
QC Report
・マイコプラズマTesting
・Passage number
・編集効率
・Primer sequences
・用いられたsgRNAのシークエンス
QC Report
・マイコプラズマTesting
・Passage number
・編集効率
・Primer sequences
・用いられたsgRNAのシークエンス
QC Report
・マイコプラズマTesting
・Passage number
・編集効率
・Primer sequences
・用いられたsgRNAのシークエンス
野生型と比較して50%以上の編集効率
一般的な必須遺伝子を除く
野生型と比較して50%以上の編集効率
一般的な必須遺伝子を除く
野生型と比較して50%以上の編集効率
一般的な必須遺伝子を除く

新製品 エクスプレス ノックアウト細胞プール

重要なデータのためにCRISPR実験失敗のリスクを回避し時間の短縮とリソース効率化

より速いデータ
アッセイをより迅速に進め、必要なデータを作成します。
アッセイにフォーカス
貴重な研究時間をアッセイに費やすことができます。
確実な結果
非常に高いノックアウト効率で信頼性の高いダウンストリームアッセイ結果が得られます。

スピードと信頼性の高いアッセイ結果

創薬のためのターゲットのバリデーションにCRISPRを活用するにしても、興味のある新規遺伝子の調査のために生物学的プロセスをモデル化するにしても、実験の失敗は時間とリソースの損失につながってしまいます。論文発表やマイルストーンがかかっている場合、信頼できるデータへのスピードは非常に重要です。
Synthego社のエクスプレス細胞プールは、高品質の編集済み細胞プールを3週間またはそれよりも早くお届けします。Synthego社のエクスプレス ノックアウト細胞プールは、重要なアッセイにおける偽陰性のリスクを低減しながら、迅速かつ信頼性の高い機能性データを得るためのソリューションです。Synthego社の高度に自動化された細胞エンジニアリングのプラットフォームと組み合わせることで、エクスプレス細胞プールは、次の実験にスピードと信頼を提供します。
エクスプレス細胞プールは、ヒトまたはマウスの不死化細胞株において、目的の遺伝子について高度に編集された細胞プールであり、3週間またはそれよりも短期間で作製されます。Cell Poolは、編集された細胞と編集されていない細胞の混合集団で構成され、広範なQCレポート、sgRNA配列のリスト、推奨PCRプライマー情報などが添付されています。

エクスプレスノックアウト細胞プールのワークフローには、マルチガイドデザインまたはユーザー定義のsgRNA配列、トランスフェクション、細胞プールの生成、ジェノタイピング、シーケンス解析が含まれます。

エクスプレス ノックアウト細胞プールは、機能的ノックアウトを得る可能性を最大化するために、タンパク質コード遺伝子を標的とするSynthego独自のマルチガイド技術を用いて設計されています。これにより、CRISPR実験ワークフローのデザイン、最適化、実行の必要性を回避し、より迅速で信頼性の高いアッセイ検証が可能になります。
またエクスプレス ノックアウト細胞プールも利用可能で、ユーザーが定義したsgRNA配列を用いて目的の転写産物やゲノム領域を特異的に標的とすることができます。

機能的ノックアウトを支えるMulti-Guide Technology

Synthego独自のmulti-guide技術により、各ターゲットに対してより確実なノックアウトが可能になるため、アッセイ結果における偽陰性の発生が最小限に抑えられます。

マルチガイドアプローチは、目的の単一遺伝子を標的とし、より小さなインデルではなく遺伝子エクソン内の断片欠失をもたらすように設計された最大3つのsgRNA(緑色のバー)を用います。
共導入すると、sgRNA は標的とするゲノム遺伝子座に同時に二本鎖切断(縦の点線)を作り、その結果、1つ以上の21bp以上の断片欠失を誘導します。
このアプローチは、シングルガイドアプローチと比較して、編集されたプールのノックアウトアレルの頻度が高いが、オフターゲット編集の発生は少ないメリットがあります。

マルチガイドがより高いノックアウトスコアを可能にします。

ヒトまたはマウスのタンパク質コード遺伝子のCRISPRノックアウト戦略を向上させます。Synthegoのマルチガイドデザインは、個々のsgRNAに依存したノックアウト戦略と比較して、常に高いノックアウト(KO)スコアをもたらします。

評価した32の標的遺伝子において、sgRNAは、マルチガイドフォーマットで導入した場合(89.9%のKOスコア)、個別のsgRNAフォーマット(69.6%のKOスコア)に対して、29.2%優れたノックアウト効率(中央値)を示しています。

遺伝子ノックアウトの持続性を示すエクスプレスノックアウト細胞プール

マルチガイド技術を利用した編集細胞プールは、数回の細胞継代後も編集効率が持続しています。

Synthegoのマルチガイドデザインを用いたエクスプレスノックアウト細胞プールの高い編集効率は、複数回の細胞継代を通して維持されています。
Synthegoのマルチガイドデザインを使用し、各ターゲットにつき最大3つの改変sgRNA(6遺伝子にわたる)をSpCas9と結合させ、RNPをU2OS細胞にトランスフェクトしました。
編集効率はトランスフェクション後の異なる時点と4継代までで測定され、各ターゲットの編集効率の中央値は85%以上でした。

マルチガイドが持続的なタンパク質枯渇を可能にします。

マルチガイド技術を用いて編集した細胞プールは、持続的なタンパク質の枯渇を示しています。これにより、これらの細胞プールを機能的アッセイに直接かつ確実に使用することができます。

5つのノックアウト標的遺伝子すべてについてウェスタンブロット解析を行った結果、ネガティブコントロールと比較して、3つの指定された時点(7日目、14日目、21日目)においてタンパク質が完全に枯渇していることが示されました。
標的遺伝子のノックアウト細胞プールは、U2OS細胞にマルチガイドsgRNAとCas9(RNPとして)をヌクレオフェクションすることによって作製しました。
陰性コントロールプールも、非標的sgRNAを用いて各標的についてトランスフェクトしました。

スタンダードノックアウト・ノックイン細胞プール

標的タンパク質をノックアウトしたノックアウト細胞プールの受託作成

CRISPR-Cas9は強力な研究ツールですが、この革新的な技術を習得には時間がかかります。Synthego社がお客様に代わって,sgRNAのデザイン,トランスフェクション最適化、遺伝子編集、およびシーケンス検証を実施から構成される,Synthego社の厳格な細胞ゲノム編集プロセスで各ノックアウト細胞プールを作製します。お客様でCRISPRの編集を最適化するのではなく、研究に時間を費やすことができます。

すべての注文には、ノックアウトプールの2つのバイアル(編集された細胞の混合集団)、未編集の細胞の2つのバイアル、および製品レポートが含まれます。

製品 タイトル(日本語/English) テクニカルシートの概要 ダウンロード
sgRNA
ゲノム編集細胞受託サービス
(日本語)適切なCRISPR Guideフォーマットを選択しましょう。
(English)Choose the Right CRISPR Guide Format
最品質で高いindel頻度をもたらすSynthego sgRNAについて
ゲノム編集細胞受託サービス (日本語)CRISPR編集するのは難しいですが、Synthegoにお任せください。
(English)CRISPR is Hard. Let Us Handle It
ゲノム編集に係る様々な工程・時間について
ゲノム編集細胞受託サービス (日本語)iPS細胞のゲノム編集
(English)CRISPR -Edited iPS Cells. Guaranteed
iPS細胞で多能性を維持してCRISPR編集
ゲノム編集細胞受託サービス (日本語)複数のモデルで実験の可能性を実現
(English)Reach Your Experimental Potential With Multiple Models
様々な細胞モデルを作成することのメリット(遠藤章先生のスタチン発見)
ゲノム編集細胞受託サービス (日本語)SynthegoはCRISPRを実験ツールとして提供します。
(English)CRISPR Done For You
Cell Pool、Cell Cloneを実験ツールとして活用
ゲノム編集細胞受託サービス (日本語)最適化されたCRISPRワークフローで遺伝子機能研究を加速しませんか。
(English)An Optimized CRISPR Workflow to Accelerate Gene Function Studies
CRISPRを200Optimizeします

<ユーザーVoice>

Synthego’s Knockout Cell Pool allowed us to get started using genome engineering in our research without having to learn and optimize CRISPR assays. It’s more efficient to have Synthego’s experts do the editing to generate results we can trust. We can stay focused on what we’re good at and generate higher quality data much faster.
John LaCava, Ph.D.
Research Assistant Professor, The Rockefeller University

特徴

  • 50%以上の遺伝子ノックアウトが保証された状態で届くため、最適化は不要です。
  • 確かなノックアウト細胞株で下流のアッセイ結果に信頼性をもたらします。
  • わずか4週間で、数百のヒト細胞株に含まれる遺伝子のノックアウト細胞プールを作成
  • ノックアウト細胞プールは細胞をすぐにアッセイでき、クローン分離に進むことができます。

CRISPRを200ものトランスフェクションを最適化します。

2つの細胞株が同じではないため、すべての細胞に最適なCRISPRプロトコールはありません。最適な条件が使用されるように、すべての単一細胞株に対して迅速なハイスループット最適化を実行します。これにより各ノックアウト細胞プールは最低50%のノックアウト効率を保証し、お客様は直接、機能アッセイまたはクローン株樹立に進むことができます。

トランスフェクションが困難な細胞株は、Synthegoの細胞株トランスフェクション最適化により克服されます。 例では通常7%未満で編集するTHP-1細胞では、200ポイントのトランスフェクション最適化により、82%の編集効率を達成する条件が特定されました。 タンパク質レベルの少なくとも50%の低下を保証し、通常75%以上のノックアウト効率を確認しました。

細胞株で50%以上のCRISPRノックアウトを保証

ノックアウト細胞プールを使用すると、あらゆる細胞株で高効率のノックアウトを達成できます。 数百の利用可能な細胞株から選択します。ICEデータはこちら

100以上の細胞株でRELA遺伝子座を編集する200の条件をテストすることにより、編集効率を最適化しました。 高い細胞生存率と最高のインデル効率を示した設定が、その細胞株を編集するためのプロトコールとして選択されます。 上記は24の一般的な細胞株のデータのノックアウト効率です。編集効率は、切断部位のPCR増幅、サンガー配列決定、それに続くICE分析によって計算されました。

最大95%のタンパク質ノックアウト効率によりクローン分離作業を低減

Synthegoのノックアウト細胞プールは、クローンの増殖なしで95%のタンパク質ノックアウトを達成しました。 ノックアウトスコアが87%のU2OS細胞で、表面タンパク質がノックアウトされた細胞プールが生成されました(左パネル、フレームシフト変異または21ヌクレオチド以上のいずれか大きいインデルの割合で、ICEで分析)。 このタンパク質のレベルをフローサイトメトリーで分析し(青)、野生型と比較して95%減少しました(緑、右パネル)。 陰性対照サンプルは、アイソタイプ対照抗体(紫色)で染色されました。 Eurofins-DiscoverXが提供するデータ。

製品内容

2 vials of ノックアウト細胞プール(1M cells/vial)

2 vials of 野生型細胞(1M cells/vial)
 (Cas9またはguide不含のエレクトロポレーション済み細胞)

Indel & Knockout Report

Certificate of Analysis

CRISPRノックアウト細胞クローン

確認済みシーケンスのノックアウトクローン細胞株の受託作成

ノックアウトクローンの作成する時間と労力を省略でできます。

遺伝子組み換えCRISPRノックアウト細胞を自分で生成することは、完了するまでに数か月かかる複雑なプロセスであり、成功を保証するものではありません。 お客様に代わり、Synthego社がノックアウトクローン細胞株を作成します。

SynthegoのCRISPRノックアウト細胞クローンは、わずか10週間で、数百のヒト細胞株について目的の遺伝子ノックアウトと100%のシーケンス検証を実施します。

<ユーザーVoice>

For important projects where it's critical that we get the highest quality editing as quickly as possible, it makes the most sense to work with Synthego to have them engineer the cells for us. Their guaranteed editing efficiency made our decision to order Engineered Cells an easy one.
Leif Oxburgh, DVM, Ph.D.
Principal Investigator, Maine Medical Center

機能的成果を伴うノックアウトクローンの効率的な作成

機能的なMyoD1ノックアウト細胞クローンの作成。4つのsgRNAをテストして、C2C12細胞でMyoD1ノックアウトを作成するのに最適なsgRNAを特定しました(左)。sgRNA 2のパフォーマンスは最高で、ノックアウトスコアは80%を超えていました。6つのクローンを増殖し、遺伝子型を決定したところ、そのすべてがホモ接合または複合ヘテロ接合のノックアウトでした。MyoD1 KOはこれらの細胞の分化能力を破壊していました。(右)。

製品内容

2 ノックアウト細胞クローン(2 vials each: 1M cells/vial)

野生型細胞2 vials (1M cells/vial)
 (Cas9またはguide不含のエレクトロポレーション済み細胞)

Indel & Knockout Report

Certificate of Analysis

Advanced Cell

ご要望に合わせたゲノム編集細胞株の受託作成

標準的な編集細胞製品ではカバーできない細胞の編集ができます。

タグ配列、SNPの導入またはコドン改変、または難しい細胞株の編集のいずれでも、当社のAdvanced Cellsが役立ちます。

<ユーザーVoice>

I decided to use Synthego’s Engineered Cells to speed up my research and also get a higher success rate. The CRISPR data is pretty important for the project, so I want to get the highest quality results as quickly as possible.
Shanshan Wan
Research Scientist, NYU Langone Medical Center

CRISPRノックインクローンの高効率化とプロジェクト短時間化

CRISPRノックインクローンの迅速な生成。GFPカセットをsafe harbor遺伝子座にノックインするために使用され、50%以上のインデル頻度を達成するために使用された修飾sgRNA(左)。この高い編集効率により、正しいノックインを持つクローンを迅速かつ簡単に選択することができました。 分析したクローンの60%以上が、目的のノックインを持っていることが確認されました(右)。このプロジェクトは、注文から出荷までわずか11週間で完了しました。

価格・ご注文方法

「細胞株名」「ノックアウト遺伝子」を E-mail(synthego_crispr@arbrown.com)までご連絡下さい。

Synthego製品EC専用注文書

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