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ScriptCap™ m7G Capping System
ScriptCap™ Cap1 Capping System
ScriptCap™ m7G Capping Systemは、ほとんどの真核生物のmRNAに見られるCap 0 構造を構築するようにデザインされています。3つの機能をもつVaccinia Virus capping酵素(VCE)を基に、5’末端にtriphosphateを持つRNAをCap 0 RNAを変換するのに必要な全ての試薬を含みます。
通常のco-transcriptional キャッピングシステム（理論上最大80%の効率）と異なり、ScriptCap™ Capping Systemで作製されたRNAは、ほぼ100%キャップ化されます。また、ScriptCap™ Capping Systemで作製されたRNAは全て適切な配置になるので、co-transcriptional systemにおけるcap analogが逆の配置で結合する問題を解決できます。
in vitro転写されたRNAのキャップ化は、ほとんどの真核細胞において安定性とトランスフェクトされたmRNAにおけるin vivo翻訳の効率を改善します。キャップ化されたmRNAはまた、in vitro翻訳システムにおいても翻訳効率をあげることができます。
Advantages
- 100% のキャップ化RNA.：ほとんどのco-transcriptionalキャッピングシステムでは最大＜80%
- Cap 1 構造：ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferaseを別途使用するとnatural Cap 1構造を作製することができます。ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferaseは翻訳効率を改善する構造を作製する唯一のシステムです。
- 適切なcapの配置：多くのco-transcriptional cap analogシステムとことなり、ScriptCap™は、適切な配置でキャップ化しin vivo 翻訳の効率を改善します。
- 高収量：標準のIVTキットのRNA転写産物を使用できるので、co-transcriptional システムに比べ高収量になります。
- コスト：より良いmRNA が低コストで作製できます。高価なcap analogを購入する必要はありません。
Figure 1.各種RNAの変性ポリアクリアミドゲル電気泳動（エチジウムブロマイド染色）
Lane 2 : in vitro転写した未キャップRNA（51base, -VCE）
Lane 3 : VCEによる反応後のキャップ化RNA（+VCE）
Lane 4 : キャップ化RNAのtobacco acid pyrophosphatase (TAP)による処理（+VCE, +TAP）
Lane 5 : キャップ化RNAをA-Plus™ Poly(A) Tailing Kitを用いてのPoly(A)付加
Figure 2. Script Capping system反応の(A)変性ポリアクリルミドゲル電気泳動と(B) オートラジオグラフ
Lane 2 : Vaccinia capping enzyme (VCE)が無いとキャッピング反応は進みません。
Lane 3 : 反応中にVCEと14C SAMが含まれます。VCEはグアニン基と14Cを含むメチル基を転移させます。(Lane 3Aおよび3B)
Table 1. 様々な形態のキャップ化、PolyA化mRNAをHeLa細胞にトランスフェクションを行い、ルシフェラーゼ活性を測定しました。
データはCap 0, poly(A)トランスフェクション結果でノーマライズされました。完全なCap 1 mRNA は、現在使用されている様々なCap 0構造と比較して、最大 50% 高い in vivo 翻訳効率を示しました。
| Cap 0作製の方法 | ScriptCap 2'-O-Methyltransferase処理 | 最終のmRNAキャップ構造 | 翻訳効率 |
| No RNA | no | none | 0% |
| ScriptCap™ m7G Capping System (Capping Enzyme) |
no | m7GpppN (Cap 0) |
100% |
| ScriptCap™ m7G Capping System (Capping Enzyme) |
yes | m7Gppp[m2'-O]N (Cap 1) | 147% |
| In vitro転写キット (Standard Cap Analog) |
no | m7GpppN (Cap 0) | 100% |
| In vitro転写キット (Standard Cap Analog) |
yes | m7Gppp[m2'-O]N (Cap 1) | 148% |
| AmpliScribe™ T7-Flash™ Transcription Kit (ARCA Cap Analog) |
no | m27,3'-O'GpppN (Cap 0) | 100% |
| AmpliScribe™ T7-Flash™ Transcription Kit (ARCA Cap Analog) |
yes | m27,3'-OGppp[m2'-O]N (Cap 1) | 128% |
RNAをキャップ化（Cap 0構造）するキット：
| 商品名 | Cat.No. | Size |
| ScriptCap™ m7G Capping System | C-SCCE0625 | 25 Reactions |
Kit Contents
- ScriptCap™ Capping Enzyme
- 10X ScriptCap Capping Buffer
- ScriptGuard™ RNase Inhibitor
- 20 mM SAM
- 10 mM GTP
- RNase-Free Water
キャップ化（Cap 0構造）RNAからCap１構造RNAを作製するキット：
| 商品名 | Cat.No. | Size |
| ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferase | C-SCMT0625 | 25 Reactions |
Kit Contents
- ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferase
- 10X ScriptCap Capping Buffer
- 20 mM SAM
- ScriptGuard™ RNase Inhibitor
- RNase-Free Water
RNAからCap1構造RNA（Cap0及びCap1）を作製するためのキット：
| 商品名 | Cat.No. | Size |
| ScriptCap™ Cap1 Capping system | C-SCCS1710 | 10 Reactions |
| C-SCCS2250 | 50 Reactions |
Kit Contents
- ScriptCap™ Capping Enzyme
- ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferase
- 10X ScriptCap Capping Buffer
- ScriptGuard™ RNase Inhibitor
- 20 mM SAM
- 10 mM GTP
- RNase-Free Water