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RNase-Free DNase I
アプリケーション
- T7、SP6またはT3 RNAポリメラーゼを用いたin vitro RNA合成後のテンプレートDNAを除去
- Klenow DNA PolymeraseなどのDNAポリメラーゼと組み合わせたニックトランスレーションによるDNAの標識化
- RT-PCR前のRNA処理1
- DNase Iフットプリント法によるDNA-タンパク質間の相互作用のキャラクタライゼーション2,3
RNase-Free DNase Iはウシ膵臓由来のエンドヌクレアーゼで、RNAのキャラクタライゼーション、操作、使用の妨げとなりうるDNAの除去や、ニックトランスレーションなど高度に精製されたDNase Iを必要とするアプリケーションに有用です。この酵素はdsDNAとssDNAを効率的に分解し、短いオリゴヌクレオチドとモノヌクレオチドの混合物とします。
- ユニットの定義
- 標準的な条件下、37℃で10分間に1 μgのpUC19 DNAをオリゴデオキシヌクレオチドに分解するRNase-Free DNase I活性を1単位とする。
- 保存バッファー
- 10 mM Tris-HCl (pH7.5)、10 mM CaCl2、10 mM MgCl2を含む50%グリセロール溶液
- 品質管理
- 10 UのRNase-Free DNase I を1 μgの合成RNA転写物と37℃で1時間インキュベーション後、アガロース電気泳動によりRNAの分解がないことを確認しています。
- 至適温度/温度不活性
- 至適温度：37℃
温度不活性：not determined
参照文献
- Kienzle, N. et al. (1996) BioTechniques 20, 612.
- Sambrook, J. et al. (1989) in: Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed.) Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.
- Galas, D.J. and Schmitz, A. (1978) Nucleic Acids Res. 5, 3157.