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Hybridase™ Thermostable RNase H
アプリケーション
- 非常に厳密なハイブリッド選択
- 等温プローブ増幅による特異的ターゲットDNA配列の診断アッセイ1,2
- 転写に基づく増幅法（例：MASBA®法）3,4
- mRNA構造の非常に厳密なマッピング
- DNA:RNAハイブリッドにおけるRNAの特異的加水分解を必要とするアプリケーション
Hybridase™ Thermostable RNase H*は、DNAやハイブリダイゼーションしていないRNAに作用することなく、DNA:RNAハイブリッド中のRNAを特異的に分解するエンドリボヌクレアーゼです。55℃で速やかに不活性化されるE. coli RNase Hとは異なり、Hybridase Thermostable RNase Hは高温でも活性があります。Hybridase Thermostable RNase Hは65℃超で至適となり、最高で95℃の温度で使用可能です。Hybridase Thermostable RNase Hには耐熱性があるため、特異的DNA:RNAへテロ二重鎖のハイブリダイゼーション厳密性が最も高くなる温度での使用が可能となり、感度と選択性を最大限に高める一方で、非特異的ハイブリダイゼーションに起因するバックグラウンドを最小限に抑えます。
- ユニットの定義
- 標準的な条件下、45℃で20分間に等モル濃度のポリチミジル酸存在下で1 nmolのポリアデニル酸を酸可溶化するHybridase Thermostable RNase H活性を1単位とする。
- 注：poly(dT):poly(A)のTmは、45℃が至適温度であるため、45℃で酵素活性単位アッセイを実施しています。多くのアプリケーションでは、至適温度が45℃よりも高い温度があります。
- 保存バッファー
- 50 mM Tris-HCl (pH7.5)、0.1 M NaCl、0.1 mM EDTA、1.0 mM DTT、0.1% Triton® X-100を含む50%グリセロール溶液
- 品質管理
- Hybridase Thermostable RNase Hは、RNA:DNAハイブリッド中のRNAを分解することが試験されており、検出可能なエキソデオキシリボヌクレアーゼ活性、エンドデオキシリボヌクレアーゼ活性およびRNase H以外のRNase活性がないことを確認しています。
- 至適温度/温度不活性
- 至適温度：45-70℃
温度不活性：非推奨
*取得済み特許または出願中特許によって保護されています。
参考文献
- Duck, P. et al. (1990) BioTechniques 9, 142.
- Bekkaoui, F. et al. (1996) BioTechniques 20, 240.
- Guatelli, J.C. et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 1874.
- Fahy, E. et al. (1991) PCR Methods and Applications 1, 25.