- 03-3545-5720（東京）
- 06-7739-7114（大阪）
EZ-QC™ mRNA Poly(A) Tail Length Assay Kit
- 標準的なポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)を用いたmRNAポリ(A)テール長の定量
- 質量分析に代わる簡単で費用対効果の高いQC用ベンチトップ法
- HPLCやLC-MSをベースとしたメソッドの限界を超えるテール長を評価可能
製品概要
EZ-QC™ mRNA Poly(A) Tail Length Assay Kitは、合成されたmRNAのpoly(A)テール長を定量的に分析します。mRNAへのpoly（A）テールの付加である3'末端ポリアデニル化は、真核細胞におけるmRNAの安定性と発現レベルに影響する重要な修飾であり、一般的にテールが長いほど安定性と翻訳効率が向上します。3'-poly(A)テールは、mRNA合成プロセスの一段階として、in vitro転写(IVT)RNAに共転写的(鋳型にコードされたテールを利用)に、または転写後(酵素による付加)に付加することができます。EZ-QC™ mRNA Poly(A) Tail Length Assay Kitは、逆転写、PCR、またはRNase H消化物を必要とする面倒なポリ(A)テール長測定法に代わって、分析を簡素化します。このキットはRNase Aを用いて mRNA分子の非アデニン残基を消化し、poly(A)テールをそのまま残すことで、標準的なポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)法に基づくテール長の決定を可能にします。
CELLSCRIPT社は、完全なmRNAの特性解析のために、EZ-QC™ mRNA Capping Efficiency Assay KitとEZ-QC™ mRNA Cap 1 Efficiency Assay Kitも提供しています。
製品性能
サンプルインプット
標準プロトコールと~0.5秒の平均画像露光時間を用いて、わずか1 pmolのpoly(A)-tailed RNAインプットから、目視で確認できるシグナルが得られます（Figure 1）。ゲルイメージングと解析ソフトウェア（Syngene® G:Box & GeneTools）を使用すると、わずか0.1 pmolのpoly(A)-tailed RNAでも、検出可能で測定可能なシグナルが得られます。暴露時間を長くしたり、ローディング量を増やしたりすることで、必要なpoly(A)-tailed RNAインプット量をさらに最小限に抑えることができます。プロトコールは堅牢です。poly(A)-tailed RNAインプット量は、サンプルの量に応じて簡単に変更できます。
Figure 1.EZ-QC™ mRNA Poly(A) Tail Length Assay Kit の入力滴定
わずか0.1 pmol mRNAのインプット量で検出可能で、ゲル解析ソフトウェアを使用して測定できます。
定量検出
1回の泳動で、さまざまなテール長やサンプルのテールタイプを検出することができます。Figure 2Aは、Poly(A) 20-merラダー（レーン1と6）、コードされた120 ntテール（レーン2）、15分酵素合成した136 ntテール（レーン3）、30分酵素合成した193 ntテール（レーン4）、60分酵素合成した261 ntテール（レーン5）を1回のゲル泳動で測定したものである。このゲルはテーリングのレベルと酵素テーリングの分配的特性の両方を示しています。テーリングの長さは、全体的なピークの均一性とシグナル強度の相関を伴い、最適な酵素条件の決定に役立ちます（Figure 2B）。
Figure 2A.EZ-QC™ mRNA Poly(A) Tail Length Assay Kitから得られた120 ntから261 ntまでのpoly(A)テール長を示すポリアクリルアミドゲル
Figure 2B.ポリアクリルアミドゲルの分析から得られたシグナルの分布
平均テール長は計算値