Endonuclease VIII

大腸菌由来のEndonuclease VIII（エンドヌクレアーゼ VIII）は、N-グリコシラーゼとAP-リアーゼの両方として機能します。 N-グリコシラーゼ活性は、損傷したピリミジンを二本鎖DNAから放出し、アプリニン（AP部位）を生成します。 APリアーゼ活性はAP部位への3 'と5'を切断し、5 'リン酸と3'リン酸を残します。Endonuclease VIIIによって認識および除去される損傷した塩基には、尿素、5,6-ジヒドロキシチミン、チミングリコール、5-ヒドロキシ-5-メチルヒダントイン、ウラシルグリコール、6-ヒドロキシ-5、6-ジヒドロチミン、およびメチルタルトロニル尿素が含まれます。Endonuclease VIIIはEndonuclease IIIに類似していますが、Endonuclease VIIIはβおよびδリアーゼ活性を有し、Endonuclease IIIはβリアーゼ活性を有します。

アプリケーション

• DNAの損傷と修復の研究
• シングルセル電気泳動（comet assay）
• DNA構造研究
• アルカリ巻き戻し

Fig1.　AP部位を含むDNAのEndonuclease VIIIによる切断

20pmolの5’末端をラベルしたdsDNA基質をEndonuclease VIIIと37℃、1時間インキュベートされました。DNAの切断は電気泳動にて確認されました。

ユニットの定義

1ユニットは、10pmolの蛍光標識されたオリゴヌクレオチド二本鎖を含む1X Endonuclease VIII反応buffer 10μl（総容量）において37℃、1時間に単一のAP部位*を含む34merオリゴヌクレオチド二本鎖1pmolを切断するのに必要な酵素の量として定義されます。
（* AP部位は、単一のウラシル残基を含む10pmolの34merオリゴヌクレオチド二重鎖を1ユニットのウラシル-DNAグリコシラーゼ（UDG）で37℃で2分間処理することによって作成されます。）

至適温度/温度不活性

至適温度：37℃

温度不活性：75℃、10分間

品質管理

純度：>99%（SDS-PAGE）

エキソヌクレアーゼフリー

保存温度

-20℃

保存バッファー

10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 250 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol

Reaction buffer (10X)

100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 750 mM NaCl, 10 mM EDTA

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Enzonomics社ヌクレアーゼ、修飾酵素、DNAポリメラーゼカタログ