Endonuclease VIII
大腸菌由来のEndonuclease VIII(エンドヌクレアーゼ VIII)は、N-グリコシラーゼとAP-リアーゼの両方として機能します。 N-グリコシラーゼ活性は、損傷したピリミジンを二本鎖DNAから放出し、アプリニン(AP部位)を生成します。 APリアーゼ活性はAP部位への3 'と5'を切断し、5 'リン酸と3'リン酸を残します。Endonuclease VIIIによって認識および除去される損傷した塩基には、尿素、5,6-ジヒドロキシチミン、チミングリコール、5-ヒドロキシ-5-メチルヒダントイン、ウラシルグリコール、6-ヒドロキシ-5、6-ジヒドロチミン、およびメチルタルトロニル尿素が含まれます。Endonuclease VIIIはEndonuclease IIIに類似していますが、Endonuclease VIIIはβおよびδリアーゼ活性を有し、Endonuclease IIIはβリアーゼ活性を有します。
アプリケーション
- DNAの損傷と修復の研究
- シングルセル電気泳動(comet assay)
- DNA構造研究
- アルカリ巻き戻し
Fig1. AP部位を含むDNAのEndonuclease VIIIによる切断
20pmolの5’末端をラベルしたdsDNA基質をEndonuclease VIIIと37℃、1時間インキュベートされました。DNAの切断は電気泳動にて確認されました。
- ユニットの定義
- 1ユニットは、10pmolの蛍光標識されたオリゴヌクレオチド二本鎖を含む1X Endonuclease VIII反応buffer 10μl(総容量)において37℃、1時間に単一のAP部位*を含む34merオリゴヌクレオチド二本鎖1pmolを切断するのに必要な酵素の量として定義されます。
(* AP部位は、単一のウラシル残基を含む10pmolの34merオリゴヌクレオチド二重鎖を1ユニットのウラシル-DNAグリコシラーゼ(UDG)で37℃で2分間処理することによって作成されます。) - 至適温度/温度不活性
- 至適温度:37℃
- 温度不活性:75℃、10分間
- 品質管理
- 純度:>99%(SDS-PAGE)
- エキソヌクレアーゼフリー
- 保存温度
- -20℃
- 保存バッファー
- 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 250 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol
- Reaction buffer (10X)
- 100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 750 mM NaCl, 10 mM EDTA