A-Plus™ Poly(A) Polymerase Tailing Kit
A−Plus™ Poly(A) Polymeraseは、基質としてATPを使用して、RNA分子の3’末端にpoly(A)を付加します1。A-Plus™ Poly(A) Polymerase Tailing Kitは、poly(A)を付加するのに必要な酵素やその他の試薬が入っています。
利点
- 高純度、高活性
- 簡便・迅速・高効率
In vitro転写キットを用いて作製されたキャップ付加RNA(60mg, 1760base ルシフェラーゼRNA)を8 unitのA-Plus™ Poly(A) Polymeraseで上記時間反応させました。
ユニット定義
50 mM Tris-HCl (pH 8.0)、250 mM NaCl、10 mM MgCl2および1 mM ATPからなる反応混合物において37°C、10分間で1nmoleのAMPを酸不溶性形態への取り込みを触媒するpoly(A) polymeraseの活性を1単位とする。
保存バッファー
50mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, and 0.1% Triton X-100を含む50%グリセロール溶液.
10X A-PlusT™ Poly(A) Tailing Buffer
0.5 M Tris-HCl (pH 8.0), 2.5 M NaCl及び100mM MgCl2
別途10mM ATP溶液が付属します。
品質管理
A-Plus Poly(A) PolymeraseがRNAのポリアデニル化を行うこと、検出可能なRNase活性、DNAエンドヌクレアーゼ活性のコンタミがないことを確認しています。
References
- Gething, M et al. (1980) Nature 287, 301.
- Drummond, DR et al. (1985) J. Cell. Biol. 100, 1148.
- Galili, G et al. (1988) J. Biol. Chem. 263, 5764.
- Belasco, J and Brawerman, G. (1993) Control of Messenger RNA Stability, Academic Press, San Diego, CA.
- Lingner, J and Keller, W, (1993) Nucleic Acids Res. 21, 2917.
- Krug, MS and Berger, SL. (1987) Methods Enzymol. 152, 262.