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Adenylator™ DNA/RNA 5’-Adenylation Kit
Adenylator™ DNA/RNA 5’-Adenylation Kitは、5’-一リン酸化されたDNAおよびRNAオリゴヌクレオチドに対し、ライゲーションを必要としない効率的な5’-末端アデニル化を可能にします。本キットは、従来の耐熱性RNAリガーゼを用いる5'-アデニル化法に代わる、強力かつ触媒作用による低温法であり、競合他社のキットに比べて3倍の収量を実現します。オリゴの環状化や連鎖化を最小限に抑えるために高温（65℃）を必要とするMth RNAリガーゼとは異なり、Adenylator™ 酵素は37℃でも安定した性能を発揮し、望ましくないオリゴの自己ライゲーション反応を触媒することはありません。
各10反応キットは、3 nmolのDNAまたはRNAオリゴを、1ステップ1時間のスケーラブルなワークフローでアデニル化します。こうして得られた5'-アデニル化オリゴヌクレオチドは、RNAの3'-末端へのライゲーションにおいて、T4 RNAリガーゼ2の截断型、あるいは截断型/K227Q変異体を用いた反応と互換性がある。こうして得られた5'-アデニル化オリゴは、RNAの3'-末端へのライゲーションにおいて、T4 RNAリガーゼ2の切断型、あるいは切断型/K227Q変異体を用いた反応と互換性がある。Adenylator™ アデニル化DNAオリゴは、次世代シーケンシングのワークフロー（例：small RNAライブラリ調製やネイティブ伸長転写産物シーケンシング（NET-seq））に使用でき、アデニル化RNAオリゴは、RNA環状化ワークフローの原料として、あるいは様々なRNA研究において利用可能です。
- IDT ssDNA 10/60 Ladder
- Untreated (unadenylated) p-DNA Oligo (23-nt)
- Treated (adenylated) p-DNA Oligo (24-nt)
- IDT ssDNA 10/60 Ladder
- Untreated (unadenylated) p-RNA Oligo (26-nt)
- Treated (adenylated) p-RNA Oligo (27-nt)
Figure 1. Adenylator™ DNA/RNA 5’-Adenylation Kitを使用することで、DNAおよびRNAオリゴヌクレオチドを効率的にアデニル化することができます。リン酸化DNA（図1A）およびRNA（図1B）オリゴヌクレオチドを、Adenylator™酵素を用いてアデニル化処理し、ポリアクリルアミドゲル（アクリルアミド20%、尿素8M、1X TBE、SYBR® Goldで染色）上で可視化しました。
- Mw - ssDNA molecular weight ladder
- UT-A - Untreated (unadenylated) p-DNA Oligo (23-nt) in Adenylator™ reaction mix
- T-A - Adenylator™ Enzyme Treated p-DNA Oligo (24-nt)
- UT-M - Untreated (unadenylated) p-DNA Oligo (23-nt) in Mth RNA Ligase reaction mix
- T-M - Mth RNA Ligase Treated p-DNA Oligo (24-nt)
Figure 2. Adenylator™ 酵素は、望ましくないオリゴヌクレオチドの自己ライゲーション反応を触媒しません。23塩基のリン酸化DNAオリゴは、Adenylator™ 酵素およびMth RNAリガーゼを用いてアデニル化され、ポリアクリルアミドゲル（アクリルアミド20%、尿素8M、1X TBE、SYBR® Goldで染色）上で可視化しました。Mth RNAリガーゼによってアデニル化されたDNAオリゴ（T-M）には、オリゴコンカテマー（赤矢印）および環状化したオリゴ（青矢印）といったライゲーション反応の副生成物が含まれている。Adenylator™酵素（T-A）を用いたアデニル化では、基質のコンカテマーが形成されたり、オリゴ基質が環状化したりすることがないため、副生成物を伴わないアデニル化オリゴが得られます。