ウイルスベクター作製・レンチウイルス・アデノ随伴ウイルス（AAV）

遺伝子治療は、ウイルスベクターやナノ粒子などの送達媒体（ベクター）を用いて遺伝子などを導入し、生体内で発現させて治療することです。遺伝子治療には、2種類あり、生体内（in vivo）に直接遺伝子を導入する方法（in vivo の遺伝子治療）と、あらかじめ細胞を取り出して生体外で遺伝子を導入し、その細胞を生体内に戻す方法（ex vivoの遺伝子治療（遺伝子細胞治療））があります。

遺伝子治療は、急速に研究開発が進んでいますが、よく使われるウイルスベクターとしては、アデノウイルスやレンチウイルスやレトロウイルスがあります。下記に特長をまとめます。

ウイルスベクターの特長

ウイルスベクターの作製工程

ウイルスベクターの作製工程は、一般的に下記のような工程になります。ウイルスの種類により使用する細胞等が異なります。

アデノ随伴ウイルス（AAV）などのウイルスベクターの精製ステップにおいては、ウイルスベクター表面とDNAが凝集することがあります。これはpH7.5においてAAVはポジティブチャージしているのに対し、DNAはネガティブﾞにチャージしているためです。そのため、DNAなどの核酸を分解し除去する必要があります。DENARASEは、あらゆる形態のDNAやRNAを2-5塩基に分解し、より不純物の少ないウイルスベクターの精製に役立ちます。また、DENARASEはGMPグレードで提供が可能です。

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ウイルスベクターの濃度の調整

ウイルスベクター作製の精製ステップでは、バッファーとウイルスベクター濃度を調整する必要があります。 タンジェンシャル フローろ過 (TFF) は、このステップで通常採用されるスケーラブルなアプローチです。Pall社ミニメイトEVO TFFシステムは、最大1Lまでのサンプルのバッファー交換や濃縮を高い信頼性で実施が可能です。

• アプリケーションガイド

• 日本ポール社サイト：ミニメイトEVO TFFシステム (ラボスケール)

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