Terminal deoxynucleotidyl Transferase, Recombinant

アプリケーション

• DNA分子の3’-OH末端へホモポリマーの付加
• ddNTPやDIG-dUTPのような修飾核酸によるDNAの3‘末端のラベリング
• TUNEL アッセイ (in situ localization of apoptosis).
• TdT-dependent PCR.
• 1分子シーケンス（single molecule sequencing）のためのテンプレートのTailing

Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT) は、DNA分子の3’-OH末端へモノヌクレオチドの付加を触媒します。他の既知のDNAポリメラーゼとは異なり、TdT触媒DNA合成は、テンプレートの方向性によりません。ポリメリゼーションには1つのdNTPが必要です。しかしながら、どのdNTP (および派生物)、もしくはどのdNTPsの組み合わせも基質¹としての役目を果たします。 突出末端、平滑末端のssDNA分子もしくはdsDNA分子は、基質になります。58.3 kDaの酵素は、5´-もしくは3´-エクソヌクレアーゼ活性を持ちません。Co²⁺ の添加により効率を上げることができます。

酵素は、サイズ500 uniもしくは2,500 unit、濃度20 U/μl提供可能です。10X Reaction Bufferと2.5 mM CoCl₂が付属します。

保存: -20°C

Storage Buffer: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1% TritonR X-100を含む50% glycerol

Unit Definition: 1 Unit is the amount of enzyme required to incorporate 1 nmol of dATP into an acid-insoluble material in 1 hour at 37°C using d(A)18 DNA oligo as a primer.

Activity Assay: TdTは、 33 mM Tris acetate (pH 7.5), 66 mM potassium acetate, 10 mM magnesium acetate, 0.5 mM DTT, 1 mM dATP, 0.25 mM CoCl2 (or acetate), 2 μM 20-mer DNA oligoと様々な量の酵素を含む10 μl反応で機能テストされています。

Source: An E. coli strain that carries the cloned TdT gene from calf thymus.

TdT 10X Reaction Buffer: 330 mM Tris-acetate (pH 7.5), 660 mM potassium acetate, 100 mM magnesium acetate, and 5 mM DTT.

Storage Buffer: 50% glycerol containing 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, and 0.1% TritonR X-100.

Contaminating Activity Assays: TdTは、検出できるエクソヌクレアーゼ活性、エンドヌクレアーゼ活性およびRNase活性がないことを確認しています。

References

1. Burrell, M.M. et al. (1993) In: Enzymes of Molecular Biology, Humana Press, New Jersey, v. 16, p. 95

プロトコール

Terminal deoxynucleotidyl Transferase, Recombinant

• 2'-Deoxyribonucleoside-5'-Triphosphate Solutions
• Fast-Link™ DNA Ligation and Screening Kit

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