T7 R&DNA™ Polymerase and SP6 R&DNA™ Polymerase

T7, SP6 R&DNA™ ポリメラーゼ*は、T7及びSP6 RNA ポリメラーゼ遺伝子のsingle-base active-site mutationを持つDNA配列によってエンコードされている遺伝子組換えの酵素です^1,2 。

active-site mutationsによりT7, SP6 R&DNA ポリメラーゼは 2’-deoxyribonucleoside triphosphates (dNTPs) を転写産物に取り込むことができる、一方、wildタイプのT7, SP6RNAポリメラーゼと同様に高いプロモーター選択性をもち、標準的なNTPsの取り込みの触媒効率を持ちます¹。2’-fluorineや2’-amino groupを持つdNTPsだけではなく、2’-deoxy-NTPs や2’-modified-dNTPsを取り込むことができるこれらのミューテーション酵素は、T7もしくはSP6のプロモーター配列をもつDNAテンプレートからrNMP/2’-dNMP、もしくはrNMP/2’-modified-dNMPの混合された転写産物をin vitro転写により高効率に合成することができます。

T7, SP6 R&DNA™ ポリメラーゼを採用してキット化しているDuraScribe® T7、 DuraScribe® SP6 Transcription Kitもあります。

DuraScribe kitは、2’-F-pyrimidine nucleotidesと標準のpurine nucleotides を含む“DuraScript RNA”(修飾されたRNA)を効率よく合成します。人の肌などに含まれるRNase A-type のRnaseは、RNAをpyrimidine dNMPsの所で切断しますが、pyrimidine 2’-F-dNMPsの所では切断されません。DuraScript RNAは、RNase A-type の酵素に完全に耐性です。2’-Fluorine-dCTP (2’-F-dCTP)及び2’-Fluorine-dUTP (2’-F-dUTP)溶液も個別に販売しております。

Applications

• mixed rNMP/2’-dNMPもしくはrNMP/2’-modified-NMPのRNA転写産物を合成
• 修飾された“RNA”転写産物はRNase A-type RNaseに耐性です。

Benefits

• mutant T7, SP6 R&DNAポリメラーゼは、wildタイプのT7及びSP6のRNAポリメラーゼのプロモーターを利用できます。
• 容易に2’-dNTPs や2’-modified-dNTPsを転写産物に取り込めます。

Unit Definition

One unit of phage RNA polymerase catalyzes the incorporation of 1 nmole of a labeled ribonucleoside triphosphate into RNA in 1 hour at 37℃ in 40 mM Tris-HCl (pH 7.5), 6 mM MgCl2, 10 mM NaCl, 2 mM spermidine, 10 mM DTT, and 0.5 mM each NTP using a DNA template with the appropriate T7 or SP6 promoter.

Storage Buffer

50% glycerol containing 50mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 1.0 mM DTT, 0.1 mM EDTA, and 0.1% Triton X-100.

5X Transcription Buffer

0.2 M Tris-HCl (pH 7.5), 50 mM NaCl, 30mM MgCl2, and 10 mM spermidine.

References

1. Sousa, R and Padilla, R. (1995) EMBO J. 14 (18), 4609.
2. U.S. Patent Nos. 5,849,546 and 6,107,037.

*The use of T7 and SP6 R&DNA™ to synthesize nucleic acids with non-canonical bases or for partial ribosubstitution is covered by U.S. patents 5,849,546; 6,107,037 and other patents issued or pending. These products are accompanied by a limited non-exclusive license for the purchaser to use the purchased product(s) solely for life science research.

Kit Contents

• T7 R&DNA™ Polymerase
• 5X Reaction Buffer
• 100 mM DTT

Kit Contents

• SP6 R&DNA™ Polymerase
• 5X Reaction Buffer
• 100 mM DTT

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