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T4 Polynucleotide Kinase, Cloned

アプリケーション

  • 32Pまたは33PでDNAおよびRNAの5’末端を標識して、DNAシークエンシング、ブロットハイブリダイゼーション実験、およびMung Bean NucleaseやS1ヌクレアーゼなどを用いた転写産物のマッピング1,2
  • オリゴヌクレオチドリンカーやその他のDNA・RNA分子をリン酸化して、後続のライゲーションに、またはAMpligase® Thermostable DNA Ligaseによるライゲーション増幅反応。
  • ゲル電気泳動やクロマトグラフィー用の標識化DNA・RNA分子量マーカーの調製

T4 Polynucleotide Kinase (PNK)は、ATPのγリン酸を、ssDNA、dsDNA、RNAの5’ヒドロキシル基、およびヌクレオシドの3’一リン酸に転移する反応を触媒する酵素です。この酵素は3’ホスホリル化ポリヌクレオチド、デオキシリボヌクレオシド3’一リン酸、デオキシリボヌクレオシド-3’,5’-二リン酸から3’リン酸を除去して3’ヒドロキシル基を生じる反応も触媒します。

ユニットの定義
標準的な条件下、37℃で30分間に[γ-32P]-ATPから1 nmolの32Pを酸不溶性に変換するT4 Polynucleotide Kinase活性を1単位とする。
保存バッファー
50 mM Tris-HCl (pH7.5) 、0.1 mM NaCl、0.1 mM EDTA、0.1% Triton® X-100、1 mM DTTを含む50%グリセロール溶液
T4 PNK 10X 反応バッファー
330 mM Tris-酢酸(pH7.8)、660 mM 酢酸カリウム、100 mM 酢酸マグネシウム、5mM DTT。アイソトープを使用しないアプリケーション用に10 mM ATP溶液を別途提供しています。
品質管理
T4 PNKは、核酸の5’リン酸化アッセイにおいて試験されており、検出可能なエキソヌクレアーゼ活性、エンドヌクレアーゼ活性およびRNase活性がないことを確認しています。

参照文献

  1. Sambrook, J. et al. (1989) in: Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.
  2. Chaconas, G. et al. (1980) Meth. Enzymol. 65, 75.
製品名 Cat.No. 濃度 容量
T4 Polynucleotide Kiase, Cloned P0503K 10 U/μl 3,000 U
Inclides 10X Reaction Buffer without ATP. ATP is available separately.

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