SpinClean™ Chelating Excellose® Kit
6XHisタグ融合タンパク質のスモールスケール精製キット。簡単・短時間でOne-Step精製できます。このキットはNi2+イオンを固定化したレジンを含むIDA Excellose® spin columnを使用し、様々なサンプルを遠心で精製できます。
少量しか発現しないタンパク質の濃縮、タンパク工学の機能スクリーニング、完全な転写産物を発現しているクローンの選別、発現レベルの比較等に最適です。ニッケル粒子はあらかじめイオン化されていますので変性および未変性条件下にてワンステップでHisタグ融合タンパクを精製できます。
- 簡単：マイクロ遠心カラムで様々なサンプルをOne-Step精製できます。
- フレキシブルプロトコール：一般的な様々なBufferが使用可能。
- 高い結合能：1ml IDA Excellose®あたり1mg Hisタグ融合タンパク質
- 便利
プロトコール
- SpinClean™カラムとコレクションチューブを装着し、マイクロチューブラックの上に置きます
- IDA Excellose®チューブをVortex後、その縣濁液500μlをカラムに入れます
- 700 x g (approx. 2,000 rpm) 2分間遠心します
- コレクションチューブに溶出液を捨てます
- Equilibration Buffer* 500 μl を加え700 x g (approx. 2,000 rpm) 2分間遠心します
- 溶出液を捨て、500μl の細胞溶解液を入れ2分間遠心します
- フロースルー分画を回収します。Washing Buffer* 500μlを加え2分間遠心します
- 洗浄分画を回収します
- 必要な場合、Step7-8を繰り返します
- Elution Buffer* 200μl加え遠心します
- 溶出液を回収します
*次の溶液は調整が必要です。
Equilibration Buffer：20mM Sodium phosphate, 0.5M NaCl, 10mM imidazole, pH8.0
Washing Buffer：20mM Sodium phosphate, 0.5M NaCl, 20mM imidazole, pH8.0
ElutionBuffer：20mM Sodium phosphate, 0.5M NaCl, 250mM imidazole, pH8.0
**Imidazole elution： 結合競合剤としてのimudazole elutionはpHを下げ緩和な条件下で溶出できます。(i.e. sodium acetate buffer < pH4.5 )
また、非特異的に結合している夾雑物を効果的に除去する為に下記の試薬を用いることができます。
- 6M 塩酸グアニジン
- 8M 尿素
- 2% Triton® X-100
- 2% Tween® 20
- 1% CHAPS
- 20mM βME
- 50% グリセロール
- 20% エタノール
6xHis tagged protein purification
Hisタグ融合タンパク質を含むE. coli ライセートをIDA Excellose® spin columnにロードしました。
- M：
- Molecular weight marker
- 1：
- E. coli細胞ライセート
- 2：
- フロースルー
- 3：
- 溶出液
キット内容
| 製品名 | 容量 | Cat.No. |
| SpinClean™ Chelating Excellose® kit | 20回 | MB-22020 |
| 50回 | MB-22050 |
| キット内容／Cat.No. | MB-22020 | MB-22050 |
| IDA Excellose® resin | 各5本 | 各13本 |
| SpinClean™カラム | 各20本 | 各52本 |
| コレクションチューブ | 各20本 | 各52本 |
| 1M Sodium phosphate Buffer (pH8.0) | 30 ml | 50 ml |
| 1M Imidazole Buffer (pH8.0)** | 30 ml | 50 ml |
| 1M Sodium acetate Buffer (pH4.5) | 30 ml | 50 ml |
| プロトコール | 1 | 1 |
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