SequiTherm EXCEL™ II Long-Read™ DNA Sequencing Kit

オートDNAシーケンスキット

SequiTherm EXECL™ II はシーケンス解析が困難な鋳型(high CC rich, hairpin structures, trinucleotide repeats, homopolymeric structures)、complementary strand-to-template strand renealingが生じやすいPCR産物等の、さまざまな鋳型に幅広く用いる事ができます。

SequiThem EXCEL™ II DNA Polymeraseに改良した事により、非特異的バックグラウンドが減少し、明確かつ正確なデータが得られます。さらに、より高いシグナル強度、感受性が増加し、Long-Readの特性が一層増しました。

• PCR産物のダイレクトシーケンスでよくみられるフルレーンストップが極力抑えられます。
• 各社DNAオートシーケンサーに適したキットを用意しています。特にLi-Cor IR2で は最高の資料が得られるキットです。
• サイクルシーケンスで解読が極端に難困な鋳型には高温イソサーマル(非サイクル)反応プロトコールで改善できます。

キット中のコントロールDNAにpSAD2(pUC ベース）が添付されており、これは75bpのヘアピン/十文字構造を形成する150bpの繰り返し配列を含んでいます。解読が困難とされるそれらのDNAでさえも解読できるキットです。

（下図CCG Repeatのシーケンス結果：Epicentre Forum 3-4抜粋）

*1：Cat.No.SE9202LCは特に400bp-1,300bpの間のシグナル感度を高くするようにTermination Mixの濃度を調整してあります。66cmシーケンスゲルをお使いの場合にお薦めします。

*2：また、25-41cmシーケンスゲルをお使いの場合はCat.No.SE9101LCをお薦めいたします。このキットは1-1,000bpのシグナル感度を高くするようにTermination Mixの濃度を調整してあります。

ノンプレミックスのKit Contents

• SequiTherm EXECL™ II DNA Polymerase
• SequiTherm EXECL™ II Sequencing Buffer
• SequiTherm EXECL™ II Long-Read™ Termination Mix G
• SequiTherm EXECL™ II Long-Read™ Termination Mix A
• SequiTherm EXECL™ II Long-Read™ Termination Mix T
• SequiTherm EXECL™ II Long-Read™ Termination Mix C
• Control Template (pSAD2)
• STOP/Loading Buffer (SE9202LC用)
• (95% (v/v) formamide, 10 mM EDTA, 0.1% Basic Fuchsin, 0.01% Bromophenol Blue(final pH=9) )
• STOP/Loading Buffer (SE8301A用)
• (95% (v/v) formamide, 10 mM EDTA, 0.1% Basic Fuchsin)
• Sterile Deionized Water

Figure 1.

SequiTherm™ EXCELとSequiThermの比較（強力な高構造をもつDNA Templateを用いた時のの比較）pSAD2 DNAはアルカリライシス法で精製され、260 nm absorbanceを計測しました。

そのあとSequiTherm™ (lanes A1 and A2) とSequiTherm EXCEL™ Kit (lanes B1 and B2)でサイクルシーケンスをしました。（template：100 fmolesとIRD41-labeled M13 Forward primer：2 pmoles）
3-step cycling profile (30 seconds at 95°C; 30 seconds at 50°C; 1 minute at 70°C)

Lanes A2 and B2 are continuations of the data shown in lanes A1 and B1, respectively. The double arrowhead indicates comparable/overlap regions of the gel. The arrow denotes primer-dimer formation with the IRD41-labeled M13 Forward primer. The horizontal line indicates the axis of symmetry of the inverted repeat. Data were visualized on a LI-COR Model 4000 DNA Sequencer. All reactions were loaded in the order G A T C

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