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ScriptCap™ m7G Capping System

ScriptCap™ m7G Capping Systemは、ほとんどの真核生物のmRNAに見られるCap 0 構造を構築するようにデザインされています。3つの機能をもつVaccinia Virus capping酵素(VCE)を基に、5’末端にtriphosphateを持つRNAをCap 0 RNAを変換するのに必要な全ての試薬を含みます。

通常のco-transcriptional キャッピングシステム(理論上最大80%の効率)と異なり、ScriptCap™ Capping Systemで作製されたRNAは、ほぼ100%キャップ化されます。また、ScriptCap™ Capping Systemで作製されたRNAは全て適切な配置になるので、co-transcriptional systemにおけるcap analogが逆の配置で結合する問題を解決できます。

in vitro転写されたRNAのキャップ化は、ほとんどの真核細胞において安定性とトランスフェクトされたmRNAにおけるin vivo翻訳の効率を改善します。キャップ化されたmRNAはまた、in vitro翻訳システムにおいても翻訳効率をあげることができます。

Advantages

  • 100% のキャップ化RNA.:ほとんどのco-transcriptionalキャッピングシステムでは最大<80%
  • Cap 1 構造:ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferaseを別途使用するとnatural Cap 1構造を作製することができます。ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferaseは翻訳効率を改善する構造を作製する唯一のシステムです。
  • 適切なcapの配置:多くのco-transcriptional cap analogシステムとことなり、ScriptCap™は、適切な配置でキャップ化しin vivo 翻訳の効率を改善します。
  • 高収量:標準のIVTキットのRNA転写産物を使用できるので、co-transcriptional システムに比べ高収量になります。
  • コスト:より良いmRNA が低コストで作製できます。高価なcap analogを購入する必要はありません。
Figure 1

Figure 1.Denaturing polyacrylamide gelstained with ethidium bromide.

Lane 2 : contains an uncapped, in vitro transcribed 51 base transcript.

Lane 3 : shows the addition of a single base due to VCE, which is consequently removed in

Lane 4 : by tobacco acid pyrophosphatase (TAP).

Lane 5 : shows that the capped transcripts are efficiently tailed using the A-Plus™ Poly(A) Tailing Kit.

Figure 2.(A) Denaturing Polyacrylamide gel and (B) autoradiograph of a ScriptCap Capping system reaction.

Figure 2

Lane 2 : shows the uncapped transcript without Vaccinia capping enzyme (VCE).

Lane 3 : includes the VCE and 14C SAM. VCE has clearly transferred the guanine base (Lane 3A) and the 14C containing methyl group (Lane 3B).

Table 1. Various different forms of capped and tailed mRNA were transfected into HeLa cells and assayed for luciferase activity.

Data is normalized to the Cap 0, poly(A) transfection results. The complete Cap 1 mRNA exhibited up to 50% higher in vivo translation efficiency when compared to the various Cap 0-type structures currently used in most transfections.

Means of Cap 0 Production ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferase Treatment Final mRNA Cap Structures Formed Translation Efficiency relative to non-treated mRNA
No RNA no none 0%
ScriptCap™ m7G Capping System
(Capping Enzyme)
no m7GpppN
(Cap 0)
100%
ScriptCap™ m7G Capping System
(Capping Enzyme)
yes m7Gppp[m2'-O]N (Cap 1) 147%
AmpliCap-Max™ High Yield
Message Maker Kit
(Standard Cap Analog)
no m7GpppN (Cap 0) 100%
AmpliCap-Max™ High Yield
Message Maker Kit
(Standard Cap Analog)
yes m7Gppp[m2'-O]N (Cap 1) 148%
AmpliScribe™ T7-Flash™ Transcription Kit
(ARCA Cap Analog)
no m27,3'-O'GpppN (Cap 0) 100%
AmpliScribe™ T7-Flash™ Transcription Kit
(ARCA Cap Analog)
yes m27,3'-OGppp[m2'-O]N (Cap 1) 128%
商品名 Cat.No. Size
ScriptCap™ m7G Capping System C-SCCE0625 25 Reactions

Kit Contents

  • ScriptCap™ Capping Enzyme
  • 10X Capping Buffer
  • ScriptGuard™ RNase Inhibitor
  • 20 mM SAM
  • 10 mM GTP
  • RNase-Free Water
商品名 Cat.No. Size
ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferase C-SCMT0625 25 Reactions

Kit Contents

  • ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferase
  • 10X Capping Buffer
  • 20 mM SAM

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