RNase III, E. coli

Ribonuclease III (RNase III)はE. coli由来のendoribonucleaseで特に2本鎖RNA (dsRNA)をdsRNAに小断片化します。^1,2

dsRNAを完全に消化することで12-15 bpの小断片dsRNAを生成します。

RNase IIIはまた、標準的な2本鎖RNAと同様にDuraScript RNAのようにDuraScribe T7 Transcription Kitで生成された標準CMP およびMP2をfluorine-CMPｗ2'-fluorine-UMPで置き換えたdsRNAも消化可能です。

Applications

• 長いdsRNAを短いdsRNAに消化
• RNA構造研究³
• RNA processingおよびmaturation研究^4,5,6

ユニット定義

酵素1ユニットは、37℃で30分間で1 nmoleリボヌクレオチドを可溶性にするために必要な酵素量です。反応溶液として3 mM Tris acetate (pH 7.8)、 mM potassium acetate、mM magnesium acetate、0.5 mM DTTを使用し、基質としてPolyA-PolyUを使用しました。

Storage Buffer

50% glycerol containing 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.5 M NaCl, and 0.1% Triton X-100.

品質管理

RNase III is tested to specifically digest double-stranded RNA transcripts in a mixture containing double-stranded RNA, single-stranded RNA, and double-stranded DNA.

5μgの1.4-kb 長dsRNAを1 unitのRNaseIIIで消化反応後1分および2分の反応液をそれぞれ12% PAGEにて分析しました。

Lane 1, 1.4-kb dsRNA;

Lane 2, RNase IIIによる消化後1分の1.4-kb dsRNA;

Lane 3, RNase III.による消化後2分の 1.4-kb dsRNA.

References

1. Robertson, H.D. et. al. (1968) J. Biol. Chem. 243, 82.
2. Lamontagne, B. et. al. (2001) Curr. Issues Mol. Biol. 3, 71.
3. Evguenieva-Hackenberg, E. and Klug, G. (2000) J. Bacteriol. 182, 4719.
4. Nicholson, A.W. (1999) FEMS Microbiol. Rev. 23, 371.
5. Grunberg-Manago, M. (1999) Annual Rev. Genet. 33, 193.
6. Drider, D. et al. (1999) J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 1, 337.

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