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MMLV Reverse Transcriptase 1st-Strand cDNA Synthesis Kit, MMLV High Performance Reverse Transcriptase

MMLV High Performance Reverse Transcriptase (MMLV HP RT)とMMLV Reverse Transcriptase 1st-Strand cDNA Synthesis Kitは、total RNAもしくは精製されたpoly(A) RNAから完全長first-strand cDNAを作製します。

MMLV HP RTは、非常に強い逆転写活性を持ち、他社MMLV RTで200 Unitsが必要な完全長cDNA合成において100Unitsのみが必要です。

MMLV HP RTには、10X Reaction BufferとDTTが含まれます。MMLV Reverse Transcriptase 1st-Strand cDNA Synthesis Kitには、MMLV HP RT、Reaction Buffer、RNase Inhibitor、dNTP PreMix Solution、DTT、oligo(dT)、random primersがキットに含まれます。

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Figure 1. MMLV High Performance Reverse TranscriptaseとMMLV Reverse Transcriptase 1st-Strand cDNA Synthesis Kitは15kb以上のmRNAから完全長cDNAを作製します。

Hela細胞total RNAを用いて逆転写をし、作製したcDNAをPCRしました。

1A. HERC1 mRNAの5’末端付近の1.3kb PCR産物の検出で完全長cDNA合成の確認

Detection of the 1.3 kb PCR amplicon from near the 5'- end of the mRNA demonstrates full-length reverse transcription of HERC1 mRNA.

1B. PCR反応後のアガロースゲル電気泳導
Lane M, 100 bp DNA ladder;
Lane 1, no reverse transcriptase control reaction;
Lane 2, MMLV HP RTを用いて作製したcDNAからのPCR産物

Table 1. 他社製品との比較(3'/5' ratio analysis of cDNA)

3つの逆転写酵素を用いて、Hala細胞のtotal RNAからlcDNAを作製しました。table. Aに示す 3'/5'比で、1.0はcDNAの3’末端と5’末端から得られるPCR産物が同量であることを示します。そのため3’/5’比は逆転写酵素がmRNAの完全長cDNAコピーを作製したことを示します。

Target Transcript (Size) EPICENTRE MMLV High Performance Reverse Transcriptase Competitior I (RNaseH- mutant of MMLV RT) Competitor P (MMLV RT)
3'/5' ratio ACTB (1792 b) 0.9 1.7 1.2
3'/5' ratio GUSB (2162 b) 1.0 6.1 2.5
3'/5' ratio TFRC (5010 b) 5.5 12.1 11.3

Figure 2. EPICENTRE社MMLV High Performance Reverse Transcriptaseで得られるcDNAは、他社逆転写酵素よりも3'/5'比が大きく改善します。

約2160-base HeLa β-glucuronidase mRNA (GUSB) をEPICENTRE's MMLV High Perfomance Reverse Transcriptaseと他社製品(2製品)で逆転写しcDNAを作製し、GUSBの3'末端と5'末端に対するプライマーを用いてqPCR (SYBRR Green I dye detection) を行いました。3'/5' 比についてはTable.1を参照

A. PCR amplicons from the 3' end and 5' end of the GUSB cDNA

B. qPCR quantification graphs for detecting the 3' amplicon and 5' amplicon of GUSB cDNA produced by EPICENTRE's MMLV High Performance Reverse Transcriptase Kit and two other commercially available reverse transcriptase enzymes.

red 5'-amplicon
green 3'-amplicon

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EPICENTRE MMLV 1st-Strand cDNA Synthesis Kit

2B 1

Company I RNase H- minus MMLV RT

2B 2

Company P MMLV RT

2B 3

アプリケーション

  • First-strand cDNA合成
  • PCR real-time PCRのためのcDNA合成
  • マイクロアレイから得られる遺伝子発現データのRT-PCRバリデーション
  • RNA interferenceによるRT-PCRバリデーションや遺伝子抑制の定量

利点

  • 15 kb以上のRNAテンプレートからの完全長cDNAの合成
  • 他社逆転写酵素に比べ高活性
  • 完全長cDNAを作製するのに最適化されたReaction Bufferが付属
  • MMLV Reverse Transcriptase 1st-Strand cDNA Synthesis Kitには、oligo(dT)プライマーとrandom nonamer (9-mer)プライマーが付属
  • ピコグラム単位のtotal RNAからfirst-strand cDNA を作製可能
  • RNase InhibitorもMMLV Reverse Transcriptase 1st-Strand cDNA Synthesisに付属

商品名 型番 容量(濃度)
MMLV Reverse Transcriptase 1st-Strand cDNA Synthesis Kit MM070150 50 反応

Contents:

MMLV Reverse Transcriptase, 10X Reaction Buffer, ScriptGuard™ RNase Inhibitor, dNTP PreMix, DTT, Oligo(dT)21Primer, Random 9-mer Primers, RNase-free Water.

商品名 型番 容量(濃度)
MMLV High Performance Reverse Transcriptase RT80125K 25,000 Units
(200 U/μl)

Contents:

MMLV High Performance Reverse Transcriptase, 10X Reaction Buffer, DTT

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