microRNA Purification Kit

特徴

Norgen社のmicroRNA 精製キットでは動物培養細胞、小さい組織サンプル、細菌などから低分子のRNA (200ヌクレオチド未満) の単離と精製を迅速に行うことができます。精製される低分子RNAにはtRNA や5S リボソームRNAのほかにmicroRNA (miRNA) や低分子干渉RNA (siRNA) のような制御RNAが含まれます。一般に20 ～ 25ヌクレオチド長のmiRNAやsiRNAは、mRNA分子に結合してその安定性や翻訳を制御することで遺伝子の発現を制御します。

精製方法はNorgen社のレジンを分離レジンとして用いるスピンカラムクロマトグラフィーに基づいたものです。このレジンはRNAをイオン濃度に依存した形で結合します。低分子のRNAはリボソームRNAやタンパク質のような他の細胞の成分からフェノールやクロロホルムを使用せずに優先的に精製されます。この精製過程には低分子のRNAの単離に用いる2つの異なるスピンカラムを用います。このmicroRNA 精製キットによって単離されたRNAは、ノーザンブロッティングやマイクロアレイ解析のような遺伝子の制御や機能の解析に関する実験操作に用いることができます。

キットの仕様・Specification

カラム結合能	50 μg
最大サンプル量	600 μL
精製RNAのサイズ	< 200 nt
10サンプル精製時間	45分

サンプルの最大スタート量
動物細胞	3 x 10⁶ Cells
動物組織	25 mg
バクテリア	1 x 10⁹ Cells

microRNA Purification Kitの利点

早くて簡単な操作！！
高速スピンカラム法により10サンプルがわずか45分！
フェノール・クロロフォルム抽出不要
RNAをフェノールやクロロフォルムのような有害な化学物質を用いずに精製します
全ての低分子RNAを単離
miRNA/siRNA/tRNA/5SrRNAなど全ての低分子RNAを単離可能
高分子RNAやゲノムDNAのコンタミを最小限に抑えます
2度のカラム処理によって低分子RNAを効率よく単離するので、高分子RNAやゲノムDNAのコンタミを抑えます
回収されたRNAは様々なアプリケーションに使用可能
精製されたRNAはノーザンブロッティングやマイクロアレイ解析などの実験に用いることが可能です

図1　Norgenのキットを用いることで低分子のRNAのみを単離しました

培養されたHeLa細胞からNorgen社のMicroRNA 精製キット(レーン3および4)と他社のキット (レーン1および2) を用いて低分子RNAを単離しました。精製した低分子RNAサンプルを尿素存在下で8%アクリルアミドゲル電気泳動しました。Norgen社のキットでは高分子のRNA断片の混入無く、低分子 (200ヌクレオチド未満) のRNAのみを精製しています。

図2　高分子のRNAを効率的に除去

HeLa細胞からの低分子RNAの単離にNorgen社のmicroRNA 精製キットを用いました。Total RNAを高分子のRNAが結合する第1カラムに乗せます。次に第1カラムを捨て、通過したサンプルを低分子のRNAが結合・精製する第2カラムに乗せます。両カラムから溶出したRNAをホルムアルデヒド存在下で1.8%アガロースゲル電気泳動をすることで、それぞれの過程で結合したRNA分子を可視化しました。第1カラムを用いることで高分子のRNAはきれいに除去されており (レーン1および2)、溶出されたRNAには高分子のRNAは混入していませんでした (レーン3および4)。

MicroRNA Purification Kitに含まれているもの

Lysis Solution
Wash Solution
Elution Buffer
マイクロスピンカラム
収集用チューブ
溶出用チューブ
Product Insert

お客様でご用意される試薬と機器

卓上微量遠心機
95-100%エタノール
β-メルカプトエタノール
RNase-free DNase I（オプション）
TE緩衝液とリゾチーム（細菌サンプルの場合）
液体窒素・乳鉢・乳棒（組織サンプルの場合）

保存状態

すべての溶液は封をした状態で、室温で保存してください。

すべての試薬は未開封の状態で最低1年間は安定です。

Cat No.	品名	容量	定価
NOR21300	microRNA Purification Kit	25回	37,000円

プロトコール

microRNA Purification Kit［PDF 230KB］

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