植物RNAの精製：MasterPure™ Plant RNA Purification Kit

アプリケーション

• RT-PCRやノーザン、miRNA解析、マイクロアレイを用いた発現プロファイリングなどのアプリケーションに適した植物total RNA(small RNAも含む)の精製

MasterPure™ Plant RNA Purification Kitは、カラムベースの精製では失われてしまうsmall RNAを含むインタクトなtotal RNAを植物組織から精製することができます。プロトコールは1時間以内で完了でき、より大量のRNAを得るためにスケールアップをすることができます。MasterPure Plant RNA Purification Kitには、ポリフェノールやポリサッカライドを不活性化および取り除き、核酸を放出し、ribonucleaseを不活性化するPlant Tissue and Cell Lysis Solutionを含まれています。 RNAはタンパク質の沈殿ステップと核酸ステップにより精製されます。MasterPureの手順にはサイズ選択のステップはありませんので、small-RNAは失われません。 他のキットとは異なり、 DNase I処理と同様にDNase Iと残存している混入物質を取り除く試薬が含まれていますので、抽出されたRNAは高く精製されています (Table 1)。バナナ、柑橘類、コットン、ゼラニウム、グレープ、トウモロコシ、メープル、ラズベリー、大豆、イチゴ、トマトの葉、アルファルファの芽、大豆の苗木、トウモロコシの苗、松の葉、菜の花の種子.

利点

• 植物組織からインヒビターを取り除くための最適化したテクノロジー
• 収量を減らすスピンカラムを使用しません：small RNAが効率的に精製可能
• 1時間以内のプロトコール
• 高純度、高収量のRNA
• フェノールやクロロホルムや他の腐食性溶媒を使用していません。

Figure 1. 様々な植物組織からのインタクトRNAの精製

植物組織RNAはMasterPure™ Plant RNA Purification Kitで精製されました。各サンプルにおいて500 ngの RNAを 1% ホルムアルデヒドゲルで電気泳動し、SYBR® Gold Iで可視化しました。

Lanes M, RNA ladder; lane 1, maize seedling RNA; lane 2, grape leaf RNA; lane 3, alfalfa sprout RNA; lane 4, strawberry leaf RNA; lane 5, raspberry leaf RNA; lane 6, pine needle RNA; lane 7, maize root RNA.

Figure 2. MasterPure Plant RNA Kitと他社きっとを用いて精製されたRNAのEnd-point RT-PCR

RNAはMMLV Reverse Transcriptase 1st-Strand cDNA Synthesis Kit とランダムプライマーを用いて逆転写されました。FailSafe™ PCR system (PreMix Dを使用)と各プライマー10 pmolと各cDNA 1 μlを用いてPCRを行いました。RT-PCR産物は電気泳動され、SYBR® Gold Iで可視化されました。

Table 1. 異なる方法を用いて精製されたRNAの純度と収量の評価

ND: Not determined

Figure 3. MasterPure™ Plant RNA Purification Kitを用いて精製されたRNAの様々な存在量の植物遺伝子のReal-Time PCR検出

Fig. 2のMaize leaf cDNAサンプルにおいてreal-time PCRを行いました。MatK (purple)、GAPDH (green)、actin 1 (red)、 TubG1 (blue).

Table 2. MasterPure™ Plant RNA Purification Kitで得られたRNAの収量

Contents: Plant Tissue and Cell Lysis Solution, 2X T and C Lysis Solution, MPC Protein Precipitation Reagent, RNase-Free Water, RNase-Free DNase 1, Proteinase K, RiboGuard™ RNase Inhibitor, 100 mM DTT, 10X DNase Buffer.

プロトコール

MasterPure™ Plant RNA Purification Kit

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