MasterPure™ Plant Leaf DNA Purification Kit

植物の葉組織からDNA抽出

フレッシュな植物の葉組織35〜100 mgからDNA精製をするために開発したキットです。１時間以内で精製でき、より多くのDNAを得るためにスケールアップも可能です。精製DNAはPCR増幅、制限酵素処理、サザンブロッティングに使用できます。

MasterPureキットは精製が困難とされる植物の葉からのDNA抽出も可能です。キットはブドウのつる、ヴィティス・ヴィニヘラなどのポリフェノール(タンニン)および多糖類が多く含まれ、抽出および抽出後のDNAの利用に妨げとなるサンプルで最適化されています。酵素による消化やCTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide)、有機溶剤は使用しません。

Applications

• 植物種のマイクロサテライトタイピング
• PCR増幅、制限酵素処理、サザンブロッティング

Benefits

• 多くの植物種(多糖類およびポリフェノールを多く含む植物種)の葉からDNAを回収可能
• 迅速：１時間以内にDNAの精製可能
• 高分子量DNA (Figure 1)
• シンプル、無毒性：有機溶剤やCTAB抽出、CsCl勾配、酵素処理は使用しません
• カラムに比べ完全な状態のDNA回収可能

Figure 1. 高収量回収DNA

MasterPureまたはG社で回収したDNA 10μlを0.7%アガロースゲルで電気泳動しました。ゲルはSYBR® Gold染色後、Dark Reader™ Transilluminatorで分析。

Lanes M, 1-kb DNA ladder; Lanes 1-4, ピノ・ノワールブドウの葉DNAをMasterPure Kitで回収したもの。

Lanes 5-8, ピノ・ノワールブドウの葉DNAをG社キットで回収したもの。

プロトコール

1. Plant DNA Extraction Solutionを含む1.5-mlのマイクロ遠心管で35〜100 mgの葉組織をすりつぶす。
2. 70℃、30分間加熱
3. 氷上で冷やした後、5分間遠心しペレット状にする。上清は新しいチューブに移し遠心を繰り返す。上清を新しいチューブに移す。
4. イソプロパノールでDNAを沈殿させ、ペレットをCleanup Solutionで再懸濁し、さらにイソプロパノールで再懸濁する。70%エタノールでウォッシュ後、TEバッファーで再懸濁する。
5. DNA溶液に色がついている場合はステップ4を繰り返す。

Figure 2. MasterPure™ Kit対カラムのDNA制限酵素処理

Lane 2はMasterPure™ Plant Leaf DNA Purification Kitで回収したタバコDNAをSsp Iで処理。Lane 3は同様の処理をQ社のカラムキットで回収したDNAで行った。MasterPure Kitで精製したDNAはSsp Iで消化できたことが反復バンドより確認できる。Q社キットで精製したDNAの反復バンドはSsp Iで消化されていない。

References

1. Bowers, J.E. et al. (1993) Am. J. Enology and Viticulture 44 (3), 266.
2. John, M.E. (1992) Nucl. Acids Res. 20 (9), 2381.
3. Thomas, M.R. et al. (1994) Plant Mol. Biol. 25, 939.
4. Rowland, L.J. and Nguyen, B. (1993) BioTechniques 14 (5), 735.
5. Bowers, J.E. et al. (1996) Genome 39, 6328.
6. Hoffman, L. and Moan, E. (1999) EPICENTRE Forum 6 (1), 1.

SYBRはMolecular Probes, Incの登録商標です。

Kit Contents

• Plant DNA Extraction Solution
• Cleanup Solution
• TE Buffer

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