MasterAmp™ RT-PCR Kit for High sensitinty

cDNA合成とRT-PCRキット

簡単・便利：RetroAmp™ DNA Polymeraseは逆転写活性を持ったDNA PolymeraseですのでcDNA合成とPCRが単一チューブで連続しておこなえます。
高感度：僅か10pgのtotal RNAからRT-PCRができます。(Fig.4)
MasterAmp™ 10x PCR Enhancer (with betaine)が添付されています。
耐熱性が有りますのでRNAが高次構造を持っている場合特に有効です。

商品名	Cat.No.	容量
MasterAmp™ RT-PCR Kit	RT71225	25 反応
MasterAmp™ RT-PCR Kit	RT712100	100反応

内容：

RetroAmp™ RT DNA Polymerase, 250 U (@ 5 U/μl) 50μl
20x RT-PCR Buffer 500μl
MasterAmp™ 10× PCR Enhancer 750μl
dNTP Mix 1μl
MgCl₂ 750μl
MnSO₄ 100μl
Control Mix 20μl
Sterile Water 2×1.5 ml

保存温度：-20℃

Table 1.RNA Templatesを増幅するプライマーシークエンンス

Amplicon	Target Size	Primer Sequence
BCR/ABL translocation	200 bp	5'-TCAGACCCTGAGGCTCAAAGTC-3' 5'-GGAGCTGCAGATGCTGACCACC-3' 5'-
E. coli 16S rRNA	479 bp	5'-GTAAAACGACGGCCAGTACTCAAATGAATTGACGGGGGC-3' 5'-AGGCCCGGGAACGTATTCAC-3'
bovine prolactin receptor (bPRLR)	643 bp	5'-GCAGATGGAGGACTTCCTACCAATTA-3' 5'-GCAGGTCACCATGCTATAGCCCTT-3'
human [beta]-actin	250 bp	5'-GCGGGAAATCGTGCGTGACATT-3' 5'-GATGGAGTTGAAGGTAGTTTCGTG-3'
tobacco mosaic virus (TMV)	1,248 bp	5'-GCCGGTTTGGTCGTCACGGGC-3' 5'-TCGCTTTATTACGTGCCTGC-3'
tobacco mosaic virus (TMV)	2,055 bp	5'-GTCTCCCAGGCAACAGCACCA-3' 5'-CCCTTTGCGGACATCACTCTT-3'

Figure 1.MasterAmp™ RT-PCR Kitを使用した様々なRNA templatesの増幅

RNA templates はスタンダードプロトコールにより逆転写されました。（bPRLRの増幅には3X MasterAmp™ Enhancerを用いた。）（サイクリングのアニーリング温度は様々である。）

Lane 1, 100 bp ladder
Lane 2, 200 bp BCR/ABL product amplified from K562 total cellular RNA
Lane 3, 643 bp bPRLR product from bovine liver total cellular RNA
Lane 4, 479 bp 16S rRNA product amplified from E. coli total cellular RNA
Lane 5, 250 bp [beta]-actin product amplified from HL60 total cellular RNA
Lane 6, 1,248 bp TMV product; Lane 7, 2,055 bp TMV product.

Figure 2.RetroAmp™ RT DNA Polymeraseを用いた時のRT-PCRにおけるMasterAmp™ PCR Enhancerの効果

bovine liver RNAのbPRLRの643 bp regionのスタンダードRT-PCRに MasterAmp™ PCR Enhancerの添加量を増やしました。
Lane 1, 100 bp ladder.

Figure 3.MasterAmp™ RT-PCR Kitを用いた高温逆転写反応

E. coli RNAからの16S rRNAの463 bp部位を増幅するプライマーと[beta]-actin gene from human placental RNAの250 bp部位を増幅するプライマーを用いました。

that amplify a Lanes 1 & 6, 100 bp ladder
Lane 2, 16S rRNA reverse transcribed at 55°C
Lane 3, 16S rRNA reverse transcribed at 60°C
Lane 4, 16S rRNA reverse transcribed at 65°C
Lane 5, 16S rRNA reverse transcribed at 70°C
Lane 7, [beta]-actin reverse transcribed at 55°C
Lane 8, [beta]-actin reverse transcribed at 60°C
Lane 9, [beta]-actin reverse transcribed at 65°C
Lane 10, [beta]-actin reverse transcribed at 70°C.

Figure 4.

Amplification of a region of the total RNAから様々な量の[beta]-actin遺伝子からMasterAmp™ RT-PCR Kitと他社製品を用いました。

[Beta]-actin was amplified from consecutive serial dilutions of human placental total RNA using 40 cycles of amplification with standard conditions.
Lanes 2-6, MasterAmp™ RT-PCR Kit
Lanes 8-12, another one-tube, one-step RT-PCR kit
Lanes 1 & 7, 100 bp ladder.

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