EZ::Tn™ <R6Kγori/KAN-2> Insertion Kit

トランスポゾンIn Vitro挿入法

EZ::Tn™ <R6Kγori/KAN-2> Insertion KitはE. coli 中で複製できないプラスミドやその他、環状DNAのシーケンス解析および遺伝分析の手助けするようデザインされたキットです。EZ::Tn™ <R6Kγori/KAN-2> Transposonの特徴はE. coli R6Kgamma複製起点とカナマイシン耐性マーカーをもつトランスポゾンです。

非常にシンプルなone-step in vitro酵素反応で、ターゲットDNA中にEZ::Tn™ <R6Kγori/KAN-2> Transposonをランダムに挿入させます。反応液の一部をpir遺伝子産物を発現する宿主E. coliにて形質転換させることでR6Kgamma-ori,複製起点を活性化させます。カナマイシンプレートにてセレクションを行います。

挿入クローンは、キットに含まれるトランスポゾンの末端に相同なプライマーを用いて双方向シーケンスできます。

EPICENTREではpir遺伝子産物を発現する次の2種のエレクトロコンピテント細胞を供給しております。

TransforMax™ EC100D™ pir+細胞は、R6Kgamma-oriを含むプラスミドを1細胞あたり15コピー保持します。潜在的に毒性をもつ、または不安定な配列であるクローンを作成する際にお勧めいたします。

TransforMax™ EC100D™ pir-116細胞は、1細胞あたり250プラスミド･コピー作成できる高コピークローニングに用います。(1)

Applications

• 複製起点や選択マーカーを認識できず、E. coliで複製できない"レスキュー" プラスミド、またはその他環状DNAにご利用ください。
• Prepareトランスポゾン挿入句ローンからシーケンス用DNAテンプレートの準備、またはプライマーウォーキングまたは再サブクローニングなしで完全にシーケンスする場合にお勧めです。
• プラスミド･エンコード遺伝子の遺伝分析用、ランダム遺伝子ノックアウト･ライブラリーの作成に。

References

1. Metcalf, W.W. et al. (1994) Gene 138, 1.

Kit Contents

• EZ::Tn™ Transposase
• EZ::Tn™ <R6Kγori/KAN-2> Transposon
• EZ::Tn™ 10X Reaction Buffer
• EZ::Tn™ 10X Stop Solution
• Forward and Reverse Primers
• Control Target DNA
• Sterile Water

保存温度：-20℃

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