EZ-Tn5™ Transposon Construction Vectors

トランスポゾン

EZ-Tn5™ pMOD™ Transposon Construction Vectorを用いてカスタムEZ-Tn5™ Transposons (Table 1)を作製できます。各ベクターは、EZ-Tn5™ transposaseを認識する高活性19bpのMosaic Endsの内側にマルチクローニングサイト(MCS)を含んでいます。カスタムTransposonは目的のDNA配列（例：選択マーカー、薬剤耐性遺伝子のようなスクリーニングマーカー、構造遺伝子、プロモーター、調節遺伝子）を組み込み、PCRや制限酵素処理により作成できます。

Transposon Construction Vectors pMOD-2とpMOD-3 ＜R6Kγori/MCS＞ はpUC-based vectorsです。colE1の複製起点とMCSに隣接するME配列を持ちます(Figure 1)。EZ-Tn5 pMOD-3＜R6Kγori/MCS＞はR6Kγori配列を持ち、様々なレスキュークローニングアプリケーションに使用できます。

pMOD-4 and pMOD-5＜R6Kγori/MCS＞はcolE1 oriを除いており、R6Kγoriのみが複製起点としてあります(Figure 2)。R6Kγ originからの複製は、TransforMAX™ EC100D™ pir+ and pir-116 E.coli cellsから産出されるpir 遺伝子産物に依存します。ほとんどのバクテリアは pir 遺伝子を持たないので、トランスポゾン作製中にコンタミしているuncut plasmid DNAは複製されず、バックグラウンドの問題も解消できます。

Features

• The multiple cloning site (MCS) enables easy cloning of any DNA of interest.
• Hyperactive 19-bp Mosaic End sequences flanking the MCS for high efficiency transposition using EZ-Tn5 Transposase.
• Unique primer binding sites at each end of the transposon for bidirectional sequencing of the insertion site using the Forward and Reverse Sequencing Primers (available separately). No need to design your own primers.
• Three options can be used to prepare an EZ-Tn5 Transposon-digestion with Pvu II, digestion with PshA I, or PCR amplification using the PCR amplification primers provided with the vector.
• EZ-Tn5 Transposons made with pMOD-3＜R6Kγori/MCS＞ and pMOD-5＜R6Kγori/MCS＞ can be used for a variety of rescue cloning applications.

Figure 1. EZ-Tn5™ Transposon Construction Vectors pMOD™-2 and pMOD™- 3＜R6Kγori/MCS＞ replicate in standard E. coli strains using a colE1 origin of replication.

Transposons made with the pMOD™-3＜R6Kγori/MCS＞ vector also have an R6Kγori within the transposon, for rescue cloning applications.

Figure 2. EZ-Tn5™ Transposon Construction Vectors pMOD™-4 and pMOD™- 5＜R6Kγori/MCS＞ lack a colE1 origin of replication and require E. coli strains that produce a pir gene product for replication.

This results in less background from uncut plasmid DNA when an artificial transposon is prepared by restriction endonuclease digestion.

Based on user suggestions, we will gradually replace the "EZ::TN™" name by "EZ-Tn5™" so it will be easier to distinguish our hyperactive Tn5-based transposon products from our "HyperMu" transposon products.

Transposon Construction Vectors include Forward and Reverse PCR Primers.

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