EZ-Tn5™ <R6Kγori/KAN-2> Insertion Kit

EZ-Tn5™ ＜R6Kγori/KAN-2＞ Insertion Kitは、E. coliで複製できないプラスミドや他の環状DNAのシーケンスや遺伝子解析を手助けします^1,2。EZ-Tn5™ ＜R6Kγori/KAN-2＞ TransposonにはE. coliのR6Kγorigin(R6Kγori)とカナマイシン耐性マーカーが含まれます。シンプルでone-stepの2-hour in vitro反応でEZ-Tn5＜R6Kγori/KAN-2＞TransposonターゲットDNAにランダムに挿入されます。その後 、pir遺伝子産物を発現するE. coli形質転換します。Insertion cloneは、カナマイシンプレートで選択され、キットに付属のプライマー（Transposonの両末端にプライマーの認識部位があります）でシーケンスすることができます。

pir遺伝子産物を発現するE. coli(Figure 1)はTransforMax™ EC100D™ pir+ cells (approximately 15 copies per cell)及び TransforMax™ EC100D™ pir-116 cell (up to 250 plasmid copies per cell)3の2種類があります。

Applications

• "Rescue" plasmidもしくはE. coliの複製起点、または(及び)適当な選択マーカーを持たないcircularized DNA (e.g., mitochondria)
• DNA sequencingテンプレートの調整（primer walkingやsubcloningの必要はありません）
• 遺伝子解析を用意にするためのIn vitroにおけるrandom gene knockoutsの作製

Figure 1. A plasmid containing the EZ-Tn5™ ＜R6Kγori/KAN-2＞Transposon can be maintained in TransforMax™ EC100D™ pir+ cells at ~15 copies per cell(Lanes 1-4) or TransforMax™ EC100D™ pir-116 cells at ~250 copies per cell(Lanes 5-8).

Colonies from randomly chosen clones were processed using the Colony Fast-Screen™ Kit. A 5-microliter aliquot of lysate was loaded per lane. M, supercoiled DNA ladder.

References

1. Jendrisak, J. et al. (2002) EPICENTRE Forum 9 (1), 14.
2. Yoon, YG and Koob, MD, (2003) EPICENTRE Forum 10 (2), 10.
3. Metcalf, W.W. et al. (1994) Gene 138, 1.

Based on user suggestions, we will gradually replace the "EZ::TN™" name by "EZ-Tn5™" so it will be easier to distinguish our hyperactive Tn5-based transposon products from our "HyperMu" transposon products.

Kit Contents

• EZ-Tn5™ Transposase
• EZ-Tn5™ <R6Kγori/KAN-2> Transposon
• EZ-Tn5™ 10X Reaction Buffer
• EZ-Tn5™ 10X Stop Solution
• Forward and Reverse Primers
• Control Target DNA
• Sterile Water

Includes control vector containing an R6Kγori.

Genotypes

TransforMax EC100D pir⁺ Electrocompetent E. coli for maintenance of plasmids at approximately 15 copies per cell: F^- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ^- rpsL nupG pir⁺(DHFR).

Includes control vector containing an R6Kγori.

Genotypes

TransforMax EC100D pir-116 Electrocompetent E. coli for maintenance of plasmids at approximately 250 copies per cell: F^- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ^- rpsL nupG pir-116(DHFR).

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