APex™ Heat-Labile Alkaline Phosphatase

組換え型源に由来した非常に純度の高い、またヌクレアーゼによるコンタミのない、ロット毎の一貫性が高いアルカリフォスファターゼです。APex™ Phosphataseは全てのタイプのDNA末端にある5'-リン酸を除去します。酵素は70℃で5分間インキュベートすることにより不可逆的に熱不活化します。APex™ Phosphataseはほとんどの制限酵素バッファーに直接加えることができ、広範囲におよぶ温度(50℃まで)、pH (5〜12)、塩濃度(例えば1 M Na+、NH₄+、K+、Cl-または アセテートまで)および10% Triton X-100含有バッファー中で高活性です。DNA、RNAまたはヌクレオチドの5'-リン酸は、基質とAPex™ Phosphataseを37℃で10分間インキュベートするだけです。同じ反応条件をほとんどのタイプのDNA末端、また処理の難しい陥凹末端に使用することが可能です。一般的な制限酵素バッファーに追加補足する必要はありません。したがってこれらのバッファーの中でベクターを処理できます。どんなタイプの制限酵素で処理された5'-末端も、ベクター1 μgから37℃、10分で、5つのdATP加水分解ユニットは完全に脱リン酸化されます。例として、5つのdATP加水分解ユニットはHindIII(5' 突出)、HincII(平滑)またはPstI(5' 陥凹)で処理された1μgのpUC19ベクターDNAの末端を10分で完全に脱リン酸化し、セルフライゲートを不可能にします。

Table 1. 制限酵素処理(overhang; 突出)での調査

• クローニングに先立ったDNAベクターの脱リン酸化でセルフライゲートを防止
• 5'-末端ポリヌクレオチド・キナーゼ標識用の5'-核酸末端の準備
• DNA/RNA基質の脱リン酸化

• 迅速、完全かつ熱易失活性アルカリフォスファターゼは次のステップへ簡単に移行が可能；時間のかかるフェノクロ精製は必要ありません
• フレキシブルかつ簡単−ほとんどの制限酵素バッファーに追加補正の必要なく、直接加え使用できます。広範囲におよぶ温度、pH、塩濃度のバッファーで活性します
• 制限酵素処理済み平滑、5'- および 3'-突出DNA末端は制限酵素または実験計画と互換性をもちます
• ほとんどのアプリケーションに対しひとつのシンプルプロトコールが適用

ユニット定義

1μlのAPex™ Heat-Labile Alkaline PhosphataseはHind III (5'突出)、Hinc II (平滑またはPst I (5'陥凹) 処理された1μgのpUC19ベクターDNAを37℃、10分で脱リン酸化します。

保存液組成

50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mM Zinc Acetate, 10 mM MgCl2, 0.1 M NaCl, 50% glycerol, and 0.1% Triton X-100.

10×反応液

330 mM Tris-acetate (pH 7.8), 660 mM potassium acetate, 100 mM magnesium acetate and 5.0 mM DTT.

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